重组赖氨酸内肽酶（RLys-C）说明书
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作者:proaaeda7
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发布时间: 2019-03-07
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赖氨酸内肽酶最初由Masaki等人从土壤细菌无色杆菌Achromobacter lyticus中分离得到，能够特异性识别与切割肽链中Lys羧基端肽键，后在产酶溶杆菌L. enzymogenes，Pseudomonas aeruginosa均提取到了氨基酸序列不同的该酶。常被用于蛋白测序及Lys-X化合物的酶催化合成。我公司选用更具优势的A. lyticus来源，克服大肠杆菌重组表达技术难题，制备产品。最适反应pH 9.0~9.5,等电点为pH 6.9~7.0；最适反应温度30~37℃，50℃以上稳定性下降。该酶稳定性较好，在4mol/L 尿素或0.2%SDS溶液中30℃孵育6hr后，生物活性未发生降低。生物活性受DFP、PMSF、TLCK抑制。
重组赖氨酸内肽酶（RLys-C）说明书
货号
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名称
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规格
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RLys-C0402
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RLys-C
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10mg
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RLys-C0403
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RLys-C
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1mg
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RLys-C0404
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RLys-C
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10μg
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1、产品简介
赖氨酸内肽酶最初由Masaki等人从土壤细菌无色杆菌Achromobacter lyticus中分离得到，能够特异性识别与切割肽链中Lys羧基端肽键，后在产酶溶杆菌L. enzymogenes，Pseudomonas aeruginosa均提取到了氨基酸序列不同的该酶。常被用于蛋白测序及Lys-X化合物的酶催化合成。我公司选用更具优势的A. lyticus来源，克服大肠杆菌重组表达技术难题，制备产品。最适反应pH 9.0~9.5,等电点为pH 6.9~7.0；最适反应温度30~37℃，50℃以上稳定性下降。该酶稳定性较好，在4mol/L 尿素或0.2%SDS溶液中30℃孵育6hr后，生物活性未发生降低。生物活性受DFP、PMSF、TLCK抑制。
检验项目
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标准规定
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性状
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白色或类白色冻干粉
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含量
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标示量的80%~120%
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反相纯度
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≥70%
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相对分子量
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31kDa±3.1kDa
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酶比活性
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≥3.0AU/mg
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2、产品特性
①标示量为分装规格，货号标示常备规格，可依据客户需求定制更大规格包装。
② CoA指标，可依据客户定制需求，出具细菌内毒素，微生物限度，宿主蛋白残留，宿主DNA残留等指标检测报告，并制定相应质量标准。
3、推荐使用方法
溶解缓冲：用无菌水或者25mmol/L Tris-HCl，pH 8.0~8.5；溶解后分装，-15℃以下保存。
酶切缓冲：50~100mmol/L Tris-HCl，pH 8.5~9.5。
推荐条件：蛋白酶:融合蛋白质量比1:25~1:100（蛋白组学或肽图），1:5000~1:20000（多肽/蛋白生产工艺），37℃反应。
针对疏水性强、溶解性较差的蛋白，可添加变性剂或者封闭二硫键（烷基化）使其空间结构被打开，从而提高酶切效率或者提高肽图覆盖率。可以参考以下方法：
a、添加变性剂：可以添加30%乙腈、8mol/L尿素或0.1～0.2%SDS在25mmol/L Tris-HCl，pH 8.0~8.5。
b、封闭二硫键：可以添加终浓度为5mmol/L的DTT在室温反应30min；再加入终浓度为10mmol/L的碘乙酰胺，在室温避光反应30min。
4、保存条件
储存稳定性：冻干粉存于-15℃以下，24个月稳定；25mmol/L Tris-HCl pH 8.0~8.5溶解后储存于-15℃以下，反复冻融5次，无活性损失。
运输稳定性：冰袋保温运输，活性稳定。
5、应用实例
RLys-C特异性酶切合成短肽合成多肽序列YDDDDKRGWK,理论酶切位点酶切产物YDDDDK， RGWK，蛋白酶:合成多肽质量比1:500，37℃酶切反应10min，LC-MS验证酶切反应特异性。
Peak# R.T M.W Sequence
Peak 1 2.54min 545.64 RGWK
Peak 2 6.26min 769.72 YDDDDK
Peak 3 7.36min 1297.35 YDDDDKRGWK
6、产品优势及用途
a.定制规模制备生产，单批次产量可达20g以上，连续批次生产质量稳定，批间无差异。
b.高纯度，高比活性，高特异性，重组表达避免提取产品杂酶残留（e.g. Arg-C，Lys-N等）；4~7mol/L尿素，0.2%SDS（w/v），30%乙腈(v/v)等强变性条件下仍保有良好活性，酶切环境下稳定性强，广泛用于蛋白组学分析，蛋白、抗体类药物质量检测，多肽、蛋白类产品制备工艺中。
c.配套技术完善，提供固定化RLys-C，高酶活保留，耐压性能良好且可循环回收使用，反应体系中不残留RLys-C蛋白酶。相关服务齐全，可提供生产工艺质量控制RLys-C蛋白酶微量残留检测ELISA试剂盒。
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